来自 Elizabethkingia miricola 的重组 PNGase F

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部件号 – 酶量 E-RPNG01     – 60 µLs 1 E-RPNG01-20   – 20 µs 1 E-RPNG01-200 – 200 µls 1 包括缓冲液、变性剂和 Triton-X 2 包括酶仅限

产品说明

PNGase F、肽N糖苷酶F、N-糖苷酶、N-聚糖酶

重组PNGase F是从含有 Elizabethkingia miricola 基因克隆的大肠杆菌菌株中分离出来的。重组酶的活性或比活性与天然酶 (E-PNG01) 没有可检测到的差异。

PNGase F 可从糖蛋白中裂解天冬酰胺连接（N 连接）的寡糖。 PNGase F 将天冬酰胺脱氨基为天冬氨酸，使寡糖保持完整。变性可将裂解速率提高高达 100 倍。大多数天然蛋白质仍然可以完全 N-去糖基化，但必须增加孵育时间。 PNGase F 在孵化条件下至少 72 小时仍保持活性。 PNGase F 不会再出现含有常见于植物糖蛋白上的α-(1,3)-连接核心岩藻糖的ove寡糖；为此，使用肽 N-糖苷酶 A。

PNGase F 重组 PNGase F 基因来自大肠杆菌中的 Elizabethkingia miricola

EC 3.5.1.52

内容量 60 µl 等份重组 PNGase F (0.3 U)，溶于 20 mM Tris-HCl，pH 7.5 包含 20 µL 和 60 µL 包装尺寸 5x PNGase F 反应缓冲液 7.5，用于 PNGase F – 250 mM 磷酸钠，pH 7.5 PNGase F 变性溶液 – 2% SDS、1 M β-巯基乙醇 PNGase F Triton X-100 – 15% 溶液

比活性 >25 U/mg

活性 5 U/ml

分子量 35,000 道尔顿

PNGase F 的 pH 范围 6-10，最佳 7.5

PNGase F 建议用法 1. 将最多 200 µg 糖蛋白添加到 Eppendorf 管中。用去离子水调整至 35 µl 最终体积。 2. 添加 10 µl 5x PNGase F Reaction Buffer 7.5 和 2.5 µl PNGase F 变性溶液。 100°C 加热 5 分钟。 3. 酷。添加2.5 µl PNGase F Triton X-100 并混合。 4. 将 2.0 µl PNGase F 添加到反应中。在 37°C 下孵育 3 小时。

特异性 PNGase F 可从糖蛋白中裂解天冬酰胺连接（N 连接）的寡糖。 PNGase F 将天冬酰胺脱氨基为天冬氨酸，使寡糖保持完整。变性可将裂解速率提高高达 100 倍。大多数天然蛋白质仍然可以完全 N-去糖基化，但必须增加孵育时间。 PNGase F 在孵化条件下至少 72 小时仍保持活性。 PNGase F 不会去除植物糖蛋白上常见的含有 Alpha-(1,3) 连接核心岩藻糖的寡糖；为此，使用肽 N-糖苷酶 A。

比活性 定义为在 37°C 下 1 分钟内催化 1 微摩尔 RNase B 释放 N-连接寡糖所需的酶量， pH值7.5。通过 SDS-PAGE 监测裂解情况（裂解的 RNase B 迁移速度更快）。

在 4°C 下储存酶。

PNGase F Re参考文献 – Bayer、E.A.、F. De Meester、T. Kulik 和 M. Wilchek。去糖基化蛋清亲和素的制备。 Appl Biochem Biotech 53: 1-9 (1995)

-Elder, J.H.和S.亚历山大。内切-b-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶 F：来自脑膜败血黄杆菌的内切糖苷酶，可裂解高甘露糖和复杂糖蛋白。 Proc Natl Acad Sci USA 79: 4540-4544 (1982)

– Tarentino, A.L., C.M.戈麦斯和 T.H. Plummer, Jr. 通过肽 :N-糖苷酶 F 对天冬酰胺连接的聚糖进行去糖基化。生物化学 24: 4665-4671 (1985)

– Tarentino A.L. 和 T.H.普卢默。天冬酰胺连接聚糖的酶促去糖基化：来自脑膜脓毒黄杆菌的寡糖裂解酶的纯化、特性和特异性。 Meth Enzymol 230: 44-57 (1994)

– Trimble R.B. 和 A.L. Tarentino。脑膜败血黄杆菌中不同内切糖苷酶(endo)活性的鉴定：内切F1、内切F2和内切F3。远藤F1和远藤H 仅水解高甘露糖和混合聚糖。 J Biol Chem 266: 1646-1 651 (1991)

– Taga, E. M., A. Waheed 和 R. L. Van Etten。来自杏仁的均质肽-N-糖苷酶的结构和化学表征。生物化学 23: 815-22 (1984)

- Tarentino AL、Trimble RB、Plummer TH。研究糖蛋白结构、合成和加工的酶法。细胞生物学方法：32: 111–39 (1989)

Anthony L.、Tarentino 和 Thomas H. Plummer Jr. 天冬酰胺连接聚糖的酶促去糖基化：寡糖裂解的纯化、特性和特异性来自脑膜败血黄杆菌的酶。酶学方法：230：44-57。 (1994)

——塔伦蒂诺·AL，普卢默·TH。蛋白质解折叠试剂促进寡糖对肽：N-糖苷酶的可及性。生物化学杂志。 257（18）：10776–80。 (1982)

Endo F2 神经酰胺聚糖酶内切糖苷酶

PNGase F PNGase F – 重组 Endo F1 Endo F2 Endo F3 Endo F Multi-Kit Endo H O-糖苷酶内切β-半乳糖苷酶神经酰胺聚糖酶